原理
血糖中β－Ｄ葡萄糖在葡萄糖氧化酶催化下，氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶催化下，氧化氧的受体——邻联甲苯胺产生有色化合物。在有足够的葡萄糖氧化酶和过氧化物酶存在下，形成有色化合物的量和葡萄糖的量成正比，并在625 nm处有最大吸收。
材料与仪器
葡萄糖
邻联甲苯胺 醋酸 葡萄糖氧化酶 辣根过氧化酶
试管 试管架 吸量管 722S分光光度计
邻联甲苯胺 醋酸 葡萄糖氧化酶 辣根过氧化酶
试管 试管架 吸量管 722S分光光度计
步骤
溶液配制：
1. 1％邻联甲苯胺溶液：1 g邻联甲苯胺溶于100 ml无水乙醇，于棕色瓶保存。
2．醋酸缓冲液（ｐH 5）：300 ml 0.15 mol/L醋酸（8.7 ml冰乙酸定容至1 L），700 ml 0.15 mol/L醋酸钠混合后调ｐH 至５（用氢氧化钠或盐酸）。
3．葡萄糖氧化酶，辣根过氧化酶：10 mg溶于10 ml水中，放于4 ℃保存。
4．含邻联甲苯胺试剂：150 mlpH5醋酸盐缓冲液，1 ml葡萄糖氧化酶溶液，1 ml过氧化物酶，1 ml 1％邻联甲苯胺溶液，混合后保存在4 ℃下，可存放7周。
5．标准葡萄糖溶液：100 mg干燥的葡萄糖溶于100 ml 0.3%安息香酸溶液（安息香酸0.3 ｇ溶于100 ml水），成1 mg/ml。
实验操作：
取三支试管，按如下顺序操作：
空白管蒸馏水 1 ml
标准管标准葡萄糖溶液 1 ml
测定管待测样品(无蛋白血滤液) 1 ml
待测样品含糖控制在400～600 μg/ml。每隔半分钟依次向各管加入含邻联甲苯胺试剂5 ml，立即混合并准确反应10 min（夏季反应时间可缩短），在波长625 nm处，每隔半分钟分别读取光密度值，以空白作为比色时的对照。
按下列公式计算：
1. 1％邻联甲苯胺溶液：1 g邻联甲苯胺溶于100 ml无水乙醇，于棕色瓶保存。
2．醋酸缓冲液（ｐH 5）：300 ml 0.15 mol/L醋酸（8.7 ml冰乙酸定容至1 L），700 ml 0.15 mol/L醋酸钠混合后调ｐH 至５（用氢氧化钠或盐酸）。
3．葡萄糖氧化酶，辣根过氧化酶：10 mg溶于10 ml水中，放于4 ℃保存。
4．含邻联甲苯胺试剂：150 mlpH5醋酸盐缓冲液，1 ml葡萄糖氧化酶溶液，1 ml过氧化物酶，1 ml 1％邻联甲苯胺溶液，混合后保存在4 ℃下，可存放7周。
5．标准葡萄糖溶液：100 mg干燥的葡萄糖溶于100 ml 0.3%安息香酸溶液（安息香酸0.3 ｇ溶于100 ml水），成1 mg/ml。
实验操作：
取三支试管，按如下顺序操作：
空白管蒸馏水 1 ml
标准管标准葡萄糖溶液 1 ml
测定管待测样品(无蛋白血滤液) 1 ml
待测样品含糖控制在400～600 μg/ml。每隔半分钟依次向各管加入含邻联甲苯胺试剂5 ml，立即混合并准确反应10 min（夏季反应时间可缩短），在波长625 nm处，每隔半分钟分别读取光密度值，以空白作为比色时的对照。
按下列公式计算：
来源：丁香实验
