原理
1. 人脂联素蛋白质序列的检索
(1)调用 Internet 浏览器并在其地址栏输入 Entrez 网址(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Entrez);
(2)在 Search 后的选择栏中选择 protein;
(3)在输入栏输入 homo sapiens adiponectin;
(4)点击 go 后显示序列接受号及序列名称;
(5)点击序列接受号 NP_004788 (adiponectin precursor; adipose most abundant gene transcript 1 [Homo sapiens])后显示序列详细信息;
(6)将序列转为 FASTA 格式保存(参考上述步骤使用 SRS 信息查询系统检索人脂联素蛋白质序列);
2. 使用 BioEdit 软件对人脂联素蛋白质序列进行分子质量、氨基酸组成和疏水性等基本性质分析
打开 BioEdit 软件 → 将人脂联素蛋白质序列的 FASTA 格式序列输入分析框 → 点击左侧序列说明框中的序列说明 → 点击 sequence 栏 → 选择 protein → 点击 Amino Acid Composition → 查看该蛋白质分子质量和氨基酸组成。
或者选择 protein 后,点击 Kyte & Doolittle Mean Hydrophobicity Profile → 查看该蛋白质分子疏水性水平。
3. 人脂联素蛋白质序列的蛋白质同源性分析
(1)进入 NCBI/Blast 网页;
(2)选择 Protein-protein BLAST (blastp) ;
(3)将 FASTA 格式序列贴入输入栏;
(4)点击 BLAST;
(5)查看与之同源的蛋白质。
4. 人脂联素蛋白质序列的 motif 结构分析
(1)expasy-tools (http://cn.expasy.org/tools/) 中的链接进入,或直接输入网址(http://myhits.isb-sib.ch/cgi-bin/motif_scan)进入网页;
(2)将人脂联素蛋白质序列的 FASTA 格式序列贴入输入栏;
(3)点击 Scan;
(4)查看分析结果(注意 Prosite Profile中的motif information)。
5. 人脂联素蛋白质序列的二级结构预测
(1)可由 expasy-tools (http://cn.expasy.org/tools/) 中的链接进入,或直接输入网址(http://www.predictprotein.org/)进入;
(2)进入 predictprotein 页面后,先 register(注册);
(3)然后将人脂联素蛋白质序列的 FASTA 格式序列贴入输入栏,submission(提交)所要分析的蛋白序列;
(4)从 email 信箱查看分析结果。
PHD predictions 结果
PROF predictions 结果
6. 人脂联素蛋白质序列的三维结构预测
(1)进入 http//www.expasy.org/swissmod/SWISS-MODEL.html (SwissModel First Approach Mode)网页;
(2)选择 Automated mode (自动模式);
(3)进入 Automated mode 界面后输入 E-Mail 地址和序列名称,将人脂联素蛋白质序列的FASTA格式序列贴入输入栏,点击「submit modeling request」后,等待结果。
(4)从 email 信箱查看分析结果。
材料与仪器
BioEdit 软件, rasmol 软件。
步骤
1. 人脂联素蛋白质序列的检索
(1)调用 Internet 浏览器并在其地址栏输入 Entrez 网址(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Entrez);
(2)在 Search 后的选择栏中选择 protein;
(3)在输入栏输入 homo sapiens adiponectin;
(4)点击 go 后显示序列接受号及序列名称;
(5)点击序列接受号 NP_004788 (adiponectin precursor; adipose most abundant gene transcript 1 [Homo sapiens])后显示序列详细信息;
(6)将序列转为 FASTA 格式保存(参考上述步骤使用 SRS 信息查询系统检索人脂联素蛋白质序列);
2. 使用 BioEdit 软件对人脂联素蛋白质序列进行分子质量、氨基酸组成和疏水性等基本性质分析
打开 BioEdit 软件 → 将人脂联素蛋白质序列的 FASTA 格式序列输入分析框 → 点击左侧序列说明框中的序列说明 → 点击 sequence 栏 → 选择 protein → 点击 Amino Acid Composition → 查看该蛋白质分子质量和氨基酸组成。
或者选择 protein 后,点击 Kyte & Doolittle Mean Hydrophobicity Profile → 查看该蛋白质分子疏水性水平。
3. 人脂联素蛋白质序列的蛋白质同源性分析
(1)进入 NCBI/Blast 网页;
(2)选择 Protein-protein BLAST (blastp) ;
(3)将 FASTA 格式序列贴入输入栏;
(4)点击 BLAST;
(5)查看与之同源的蛋白质。
4. 人脂联素蛋白质序列的 motif 结构分析
(1)expasy-tools (http://cn.expasy.org/tools/) 中的链接进入,或直接输入网址(http://myhits.isb-sib.ch/cgi-bin/motif_scan)进入网页;
(2)将人脂联素蛋白质序列的 FASTA 格式序列贴入输入栏;
(3)点击 Scan;
(4)查看分析结果(注意 Prosite Profile中的motif information)。
5. 人脂联素蛋白质序列的二级结构预测
(1)可由 expasy-tools (http://cn.expasy.org/tools/) 中的链接进入,或直接输入网址(http://www.predictprotein.org/)进入;
(2)进入 predictprotein 页面后,先 register(注册);
(3)然后将人脂联素蛋白质序列的 FASTA 格式序列贴入输入栏,submission(提交)所要分析的蛋白序列;
(4)从 email 信箱查看分析结果。
PHD predictions 结果
PROF predictions 结果
6. 人脂联素蛋白质序列的三维结构预测
(1)进入 http//www.expasy.org/swissmod/SWISS-MODEL.html (SwissModel First Approach Mode)网页;
(2)选择 Automated mode (自动模式);
(3)进入 Automated mode 界面后输入 E-Mail 地址和序列名称,将人脂联素蛋白质序列的FASTA格式序列贴入输入栏,点击「submit modeling request」后,等待结果。
(4)从 email 信箱查看分析结果。
注意事项
1. 需下载软件入 rasmol 查看三维图象。
2. 有时结果比较快,会马上有结果发到 E-Mail,通过 E-Mail 链接即显示结果页面。但有时候比较慢。
来源:丁香实验