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煮沸小量制备法

最新修订时间:

原理

推荐采用本方案从1~24个菌落培养液中制备少量的质粒DNA,尽管该方案十分快捷,但制备的DNA的质量要比碱裂解法差。

材料与仪器

培养基
STET TE
平板

步骤

1.  接种一个单菌落于5 ml LB培养基中,于37 °C培养至饱和状态或至少到对数生长中期(约6 h)。

2.  取1.5 ml菌液以最大转速离心20 s,弃上清。

3.  加入300 μl含200 μg溶菌酶的STET溶液重悬沉淀。在涡旋混合器上振荡混匀,冰上放置 30 s~10 min。

4.  将管放人沸水中(100°C) 1~2 min。

5.  离心15~30 min,吸上清移人一个新的微量离心管中。

6.  加人200 μl预冷的异丙醇,于-20°C放置15~30 min。

7.  以最大转速离心5 min,倒转离心管,弹数次,去除上清,真空干燥直至沉淀呈透明。

8.  沉淀溶于50 μl TE缓冲液中,于4°C短期保存,于-20°C或-70°C长期保存。取5 μl进行限制酶酶切分析。
 
 

注意事项

1.  为了获得高产量的DNA,一定要使菌体完全重悬。

2.  如有必要,往待消化混合液中加人1μl 10 mg/ml RNA酶溶液(不含DNA酶)以去除污染的RNA。

常见问题

1.  参考文献:Birnboim,1983; Heetal,1991;Holmes and Quigley,1981。

2.  撰稿人:JoAnneEngebrecht,Roger Brent,and Mustak A,Kaderbhai。

来源:丁香实验

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