原理
效关系呈直方双曲线,符合Clark 方程式线形关系,可以用Scott 比值法的直线回归运算。pA2是拮抗参数(antagonism parameter),表示竞争性拮抗剂作用的强度,其值越大说明拮抗剂的作用越强。pA2的概念是:能使激动剂的浓度提高到二倍时产生原来的效应(即50 %的最大效应,或50%的受体被激动剂占领)所需拮抗剂摩尔浓度的负对数,pA2 = -log[I]= -logKI。
材料与仪器
M Atropine M ACh
BL-420生物采集处理系统 张力传感器 保温式麦氏浴槽 超级恒温水浴 “L”型通气钩 高位吊瓶 量筒 烧杯 培养器 氧气瓶 外科剪刀 眼科剪刀 眼科镊子 缝衣针 棉线 注射器 台式营养器
步骤
一、首先调试BL-420生物采集处理系统,使进入肌张力测定状态.
1. 在主菜单中用鼠标选择〈实验〉中的〈消化〉,选择系统显示<平滑肌生理特性>。
2. 在界面右侧控制参数区选择〈张力〉,〈选择3 g〉,扫描速度1.0 s/div,确定信号输入,选择〈通道2〉,在工具菜单选择快速归零(空载时钩上无任何东西)。
3. 在主菜单中选择〈示波〉,进入示波状态。
4. 在主菜单中工具栏选择〈网格切换〉对背景网格进行切换为细格,并在选项中选择波形颜色红色。
二、调节仪器:
麦氏浴槽中加50 ml 台氏液,调节温度38 ℃±0.5 ℃ ;氧气2~3个气泡/秒,并制备豚鼠回肠标本。
三、正式实验:
1. 将肠管标本两端用缝衣针各穿一线,一端打一空结(约l cm 小套),另一端穿上长线打结,用眼科镊钳住空结固定于通气钩上,放入麦氏浴槽中,将另端长线的尽端打一空结,挂在张力换能器的小钩上,调节换能器高度,使前负荷为1 g,稳定标本20 分钟。
2. 在主菜单下按键选择〈记录状态〉,先描记一段正常曲线,然后按下列顺序给药。
(1)向麦氏浴槽中加入3×10-3 M ACh 0.1 ml,观察曲线变化,检查肠管是否有兴奋作用,然后冲洗肠管,使其恢复至正常。
(2)按表1 所给的剂量累积加乙酰胆碱,制作乙酰胆碱的累积量效曲线。具体作法:先加小剂量ACh,若有反应则当反应达最高峰时立即加下一剂量ACh,在每加一次药时都需用标记,只标加药序号,不打药名,直至曲线上升至最高峰不再升高为止。将系统转入“示波状态”,用台氏液冲洗肠管3遍,稳定标本15 分钟,使恢复至正常。
(3)在主菜单下选择〈记录状态〉,向浴槽中加3×10-3M Atropine 0.1 ml,并标记药名,过1 分钟后再一次制作Ach 的累积浓度量效曲线。
3. 在主菜单下选择“结束实验”。激活工具栏,系统进入分析状态。
表1 Concentration of Ach
四、结果
1. 在主菜单下分析项可选择区域测量、标记查询、开始反演、鼠标捕捉,测量后按工具栏中取消标志线,分别测出正常曲线及每次加药后的张力大小,最后以乙酰胆碱引起最大收缩力为100%,分别计算各剂量反应的百分率
2. 再以各剂量反应的百分率为纵坐标,以剂量的负对数为横坐标,绘出剂量反应曲线。
3. 再根据公式求出pA2值。pA2= log (B/A –1)-logC
A:在无阿托品时,引起最大反应的50%时所需乙酰胆碱的浓度。
B:在阿托品存在下,引起最大反应的50%时所需乙酰胆碱的浓度。
C:为拮抗剂阿托品的浓度。
注意事项
和阻断剂(阿托品)应该用克分子浓度(mol/L)。
2. 体组织实验应特别注意以下环节:
(1)组织标本制备应轻巧,避免牵拉、压迫;
(2)生理溶液的配制应十分准确;
(3)实验中注意浴槽内温度恒定,并注意浴槽内不断给予气体,有条件者可给予95 %的O2和 5%的CO2。
(4)待组织收缩反应平衡后,再开始实验。
3. 实验中以累加方式给药,每次给药后不冲洗标本
4. 切勿随意改变生物信号处理采集系统的实验参数设置。
常见问题
二、简述pA2的概念和意义。
来源:丁香实验