原理
暗视野照明法是一种不使照射被检物体的光线直接进入物镜的照明方法。常常用它来观察没有染色的活体细胞或胶体粒子。利用此照明法，在镜检时不能直接看到通过标本的照明光线，只有被检物体反射或衍射的光线进入物镜可以提高分辨率，在暗视野中可以看到明亮的被检物体的存在和运动，但它们的内部结构却看不清楚。
材料与仪器
小白鼠
台盼兰 刚果红
光镜 注射器 载玻片 盖玻片 解剖器材 滴管 移液管 试管 玻璃片
台盼兰 刚果红
光镜 注射器 载玻片 盖玻片 解剖器材 滴管 移液管 试管 玻璃片
步骤
一、自制遮光板变普通显微镜为“简单的暗视野显微镜”。
步骤：
1. 将显微镜聚光器调到最高位，用低倍镜调焦至清楚。
2. 取下目镜，从镜筒中观察并调节光圈的大小，使其与镜筒中所见物镜的视野相等。
3. 放一块透明玻璃于载物台透光孔上，用尺子测量光圈孔径。
4. 按照图1的形状，用黑纸剪成与调节后光圈孔径一样大小的中央遮光板。
5. 将中央遮光板放置在显微镜的滤光框上，即可进行标本的暗视野观察。
注：如果使用高倍镜观察标本时，应按高倍镜调焦的视野大小重新制作中央遮光板。
图1中央遮光板
a. 光圈孔径
b. 滤光片直径
a. 光圈孔径
b. 滤光片直径
二、观察蟾蜍上颌粘膜上皮细胞的纤毛运动
步骤：
1. 用捣毁脑脊髓的方法处死蟾蜍。
2. 腹部向上将蟾蜍固定在蜡盘上。
3. 沿蟾蜍二侧口角向后剪开约1厘米，将下颌翻转固定在腹部。
4. 在上颌中线距喉头1厘米处放置腊屑，观察腊屑向什么方向移动，记录腊屑开始移动到消失的时间（见图2蟾蜍口腔内面图）。
5. 然后，用眼科剪刀剪取咽头前部的上颌粘膜约2×2 cm2 小块，用牙签挑取剪下的粘膜，将纵切面贴于载片上。
6. 加一滴生理盐水于载玻片标本上，加盖玻片，镜检。
图2 蟾蜍口腔内面图
7. 结果：
（1）在低倍镜下观察上颌粘膜细胞纤毛运动的现象。
（2）换高倍镜仔细观察纤毛有规律的运动。
三、暗视野观察蟾蜍精子的鞭毛运动
步骤：
1. 将前面实验所用蟾蜍沿腹中线开腹，暴露出黄色圆柱状精巢。
2. 剪取一侧精巢于盛有自来水的平皿中，用镊子夹住精巢的一端，清洗去血污。
3. 移取洗净的精巢于另一干净的平皿上，用眼科剪将精巢充分剪碎后，加入数滴自来水混匀。
4. 用吸管吸取平皿内液体，滴一滴于载玻片上，盖上盖玻片，稍待2~3分钟于镜下观察。
5. 结果：
（1）在低倍镜下可见到视野中有许多精子：头部呈长锥形，尾为细长的线状结构。
（2）置高倍镜下观察：可见有许多靠尾部鞭毛弯曲摆动驱使而运动的精子，测量鞭毛长度。
来源：丁香实验
