材料与仪器
酵母菌
TES 酸性酚 氯仿 乙酸钠 乙醇
离心管 离心机 摇床
TES 酸性酚 氯仿 乙酸钠 乙醇
离心管 离心机 摇床
步骤
1. 酵母细胞在10 ml 培养基中生长至指数中期（OD600=1.0）。
2. 将培养液转移到50 ml，离心管，于4℃，1 500 g 离心3 min。
3. 弃上清，菌体沉淀用1 ml 冰冷的水重悬，转移至一个干净的1.5 ml 微量离心管中， 4℃离心10 s，弃上清，继续步骤4。需要时，将离心管置于干冰上速冻。
4. 用400 μl TSE溶液重悬细胞沉淀，加400 μl 酸性酚，激烈振荡10 s，65℃温育30~60 min，不时用旋涡振荡器短暂振荡。
5. 冰浴放置5 min，4℃高速离心5 min。
6. 水（上）相移到一个干净的1.5 ml 微量离心管中，加400 μl 酸性酚，激烈振荡，重复步骤5。
7. 将水相移到一个干净的1.5 ml 微量离心管中，加入400 μl 氯仿，激烈振荡，4℃高速离心5 min。
8. 将水相移到一个新管中，加40 μl 3mol/l 乙酸钠，pH5.3及1 ml 冰冷的无水乙醇沉淀，4℃高速离心5 min，在冰冷的70%乙醇中快速振荡以洗涤RNA沉淀。如上离心以沉淀RNA。
9. 沉淀用50 μl 水重溶，用分光光度法测A260及A280以确定浓度，于-70℃或-20℃贮存，可使用1年。
注意事项
不要用高浓度的细胞制备RNA，因为进入静止期后，结果的一致性差，RNA产量不稳定。
来源：丁香实验
