材料与仪器
酵母
TE RNA酶 乙酸铵 无水乙醇
离心机 培养箱 玻璃培养管
TE RNA酶 乙酸铵 无水乙醇
离心机 培养箱 玻璃培养管
步骤
1. 在18 mm×150 mm 无菌玻璃培养管或17 mm×100 mm 无菌聚丙烯酰胺管中用10 ml YPD培养基过夜培养酵母菌至静止期。
2. 培养物室温下在台式离心机上1 200 g 离心5 min，吸出或倒掉上清，细胞用0.5 ml水重悬。
3. 将重悬细胞转移至离心管中，室温下离心5 s，倒掉上清，在旋涡混合器上快速振荡分散菌体沉淀。
4. 细胞用200 μl 破菌缓沖液重悬，加0.3 g 玻璃珠（约200 μl 体积）及200 μl 酚/氯仿/异戊醇，高速振荡3 min。
5. 加200 μl TE缓冲液，快速振荡，高速离心5 min，室温下将水相转移到一个干净的离心管中，加1 ml 无水乙醇，颠倒混匀。
6. 室温下高速离心3 min，去上清，沉淀用0.4 ml TE缓冲液重悬。
7. 加30 μl 的1 mg/ml RNA酶A，混合，37℃温育5 min。
8. 加10 μl 4 mol/l 乙酸铵及1 ml 无水乙醇，颠倒混匀，室温下高速离心3 min，弃上清，干燥沉淀，DNA用100 μl TE缓冲液重悬。
来源：丁香实验
