原理
检查白细胞移动抑制因子的存在,是借其抑制白细胞移动的生物活性为指标的,依观察白细胞移动的方式不同,移动抑制试验有三种不同的方法,即毛细管法,琼脂糖打孔法及琼脂糖微滴法,这里介绍毛细管法。
材料与仪器
白细胞
细胞培养液 Hanks液 淋巴细胞提取液
毛细玻璃管 盖片 离心机 试管 滴管
细胞培养液 Hanks液 淋巴细胞提取液
毛细玻璃管 盖片 离心机 试管 滴管
步骤
1. 淋巴细胞提取。
2. 用无菌镊子夹毛细管,插入细胞悬液中,使细胞悬液借毛细管现象进入毛细管内,在离上端7~8mm时,将毛细管取出,装入各毛细管中,使细胞悬液高度力求相对等。
3. 将毛细管空端经火焰封固端朝下置试管中,于水平离心机内1000转/5,10分钟。
4. 取出毛细管可见细胞被压紧里4~6 mm 高的柱,表层发白主要是白细胞,下层发红为红、白细胞混合存在。用小砂轮在毛细管壁的细胞——液体界面处划痕,小心折断。
5. 将溢满细胞的毛细管蘸少许凡士林,置平底凹玻中固定,每凹放2~8只毛细管,而后滴加培养液,将毛细管分为两组,每组3~4支,一组为实验组,另一组为对照组。
6. 试验组用199培养加适量抗原作培养液,对照组只用199液作培养液,不加抗原。
7. 凹孔上加盖玻片封闭,勿留有气泡,将凹玻片置于铺有湿布纱布的铝盒中,置37℃温箱中培养18~22hr。
8. 取出凹玻片,用解剖显微镜测定各毛细管白细胞移动的扇面之长短直径。试验结果用移动指数MI表示:
9. 正常值80~120%。80%以下皆为抑制,即移动抑制阳性。120%以下皆为刺激,刺激反应的产生可能是抗原浓度偏低。
来源:丁香实验