材料与仪器
蛋白质
SE缓冲液
层析柱
SE缓冲液
层析柱
步骤
1. 用已脱气HPLC级水洗去SE柱的贮存溶剂，流速1 ml/min。在室温以已脱气的SE缓冲液在1 ml/min 流速平衡SE柱30 min 或直至基线稳定。
2. 注射100 μl 缓冲液进行一次空白样品的假层析，检测器设定在210~220 nm，0.1~1.0 AUFS。适宜的设定一般是：100 pmol 时为0.1AUFS，500 pmol 时0.3，1 nmol 时0.5，2 nmol 时1.0 ；作图速度为0.5 cm/min。
3. 在2 000 g 离心蛋白标准或蛋白混合物5 min 注射100 μl 上清，并重复步骤2操作。收集每个层析峰于不同的聚丙烯管子，并确定峰的洗脱体积。
2. 注射100 μl 缓冲液进行一次空白样品的假层析，检测器设定在210~220 nm，0.1~1.0 AUFS。适宜的设定一般是：100 pmol 时为0.1AUFS，500 pmol 时0.3，1 nmol 时0.5，2 nmol 时1.0 ；作图速度为0.5 cm/min。
3. 在2 000 g 离心蛋白标准或蛋白混合物5 min 注射100 μl 上清，并重复步骤2操作。收集每个层析峰于不同的聚丙烯管子，并确定峰的洗脱体积。
4. 各分部组分脱盐，并用Speedvac蒸发器除去溶剂。
5. 最后一个洗脱峰的保留时间不应超过第1个峰的2倍，如果不是这样的话，流动相加20%甲醇以抑制蛋白与介质的结合。
来源：丁香实验
