原理
运用组织块贴壁法进行SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞培养，并用倒置相差显微镜观察、HE染色后形态学观察以及用免疫组化对培养细胞进行鉴定。
材料与仪器
SD大鼠
PBS FBS DMEM
手术剪 手术钳 眼科剪刀 眼科镊子 大头针 手术刀 培养皿
PBS FBS DMEM
手术剪 手术钳 眼科剪刀 眼科镊子 大头针 手术刀 培养皿
步骤
一、实验步骤
2. 置入超净台中，将大鼠固定于杀鼠板上，在无菌条件下打开腹腔，分离出胸主动脉、腹主动脉， 摘出。
3. PBS 清洗3 遍，剥去外膜，用手术刀片刮去内膜，留下中膜并将其移入1 mL 的培基中、剪成1x1 mm2 大小组织块。
4. 再将PBS清洗组织块，移入25 mL 的培养瓶中，用尖嘴弯管均匀贴好组织块，放入37℃、5% CO2的培养箱倒置培养6 小时后，待组织块贴壁后，再加入2.5 mL 培养液后放回培养箱中。
5. 随后每3 天予以全量换液。
二、结果
3-5 天后可见组织块周围有细胞爬出，大约2 周后80－90%融合。
1. SD 大鼠(150-200 g)，断头，浸入75%的酒精中15 min。
2. 置入超净台中，将大鼠固定于杀鼠板上，在无菌条件下打开腹腔，分离出胸主动脉、腹主动脉， 摘出。
3. PBS 清洗3 遍，剥去外膜，用手术刀片刮去内膜，留下中膜并将其移入1 mL 的培基中、剪成1x1 mm2 大小组织块。
4. 再将PBS清洗组织块，移入25 mL 的培养瓶中，用尖嘴弯管均匀贴好组织块，放入37℃、5% CO2的培养箱倒置培养6 小时后，待组织块贴壁后，再加入2.5 mL 培养液后放回培养箱中。
5. 随后每3 天予以全量换液。
二、结果
3-5 天后可见组织块周围有细胞爬出，大约2 周后80－90%融合。
注意事项
第四步中最后加入2 mL 培养液时应使其顺无组织块的皿边缘缓慢流下，勿使组织块吹下。
来源：丁香实验
