原理
材料与仪器
野生型枯草芽孢杆菌菌株BS501a
Spizizen salts母液 CaCl2 氨基酸 GM II培养基 GM I培养基MgCl2 酵母粉 K2HPO4·3H2O 水解酪蛋白 葡萄糖 柠檬酸钠 蒸馏水 KH2PO4 MgSO4
微孔滤膜 离心机 锥形瓶 离心管 灭菌锅 摇床
Spizizen salts母液 CaCl2 氨基酸 GM II培养基 GM I培养基MgCl2 酵母粉 K2HPO4·3H2O 水解酪蛋白 葡萄糖 柠檬酸钠 蒸馏水 KH2PO4 MgSO4
微孔滤膜 离心机 锥形瓶 离心管 灭菌锅 摇床
步骤
一、实验材料准备
1. 枯草芽孢杆菌感受态制备用贮存液
1. 枯草芽孢杆菌感受态制备用贮存液
(1)10xSpizizen salts母液: 15% K2HPO4·3H2O,6% KH2PO4,2% (NH4 ) 2 SO4,0.2% MgSO4,1% 柠檬酸钠,溶于蒸馏水中,6.6 x104 Pa高压灭菌,室温贮存。
(2)10% 酵母粉、1% 水解酪蛋白和25 mmo l /L MgCl2, 6.6 x104 Pa高压灭菌, 酵母粉溶液最好现用现配,水解酪蛋白和
MgCl2溶液可室温贮存;20%葡萄糖、0.25% 所需氨基酸和0.1 mo l/L CaCl2,用0.22 um的微孔滤膜过滤除菌,葡萄糖溶液和CaCl2
MgCl2溶液可室温贮存;20%葡萄糖、0.25% 所需氨基酸和0.1 mo l/L CaCl2,用0.22 um的微孔滤膜过滤除菌,葡萄糖溶液和CaCl2
溶液室温贮存, 氨基酸溶液- 20℃ 贮存。
2. 枯草芽孢杆菌感受态制备用培养基
(1)GM I:1mL 10 xSpizizen salts, 0.1 mL,10% 酵母粉,0.25 mL 20% 葡萄糖,0.2 mL 1% 水解酪蛋白,0.2 mL 0.25%所需氨基酸,补充灭菌蒸馏水至总体积10 mL。
(2)GM II:1 mL 10xSpizizen salts,0.05 mL10%酵母粉, 0.25 mL 20% 葡萄糖,0.04 mL 1% 水解酪蛋白,0.2 mL 0.25%所需氨基酸, 0.05 mL 0.1mo l/L CaCl2, 1 mL 25 mmo l/L MgCl2, 补充灭菌蒸馏水至总体积10mL。
二、实验步骤
1. 挑取一新鲜培养的野生型枯草芽孢杆菌菌株BS501a菌落接种于2.5 mL GMI培养基中,30℃,130-150 r/min振荡培养过夜。
2. 将过夜培养物按10%接种量接种于2.5 mL新鲜的GM I中,37℃,200- 230 r/min振荡培养3.5h。
3. 再将培养物进行第二次传代, 接种于5 mL GMII培养基中,野生型菌株BS501a按5% 接种量进行第二次传代,37℃,200-230 r/min振荡培养90 min。
4. 取1mL培养物,5 000 r/min室温离心5 min,用1 /10体积上清液重新悬浮细菌沉淀,即为枯草芽孢杆菌感受态细胞。
来源:丁香实验