机械法
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原理
这是一种快速简便提取植物总DNA的方法。先将新鲜的叶片在液氮中研磨，以机械力破碎细胞壁，然后加入十六烷三甲基溴化铵分离缓冲液，使细胞膜破裂。同时将核酸与植物多糖等杂质分开（十六烷三甲基溴化铵，简称CTAB，是一种阳离子去污剂），再经氯仿-异戊醇抽提去除蛋白，即可得到适合于酶切的DNA。
材料与仪器
幼嫩的植物材料
液氮 CTAB抽提缓冲液 NaAC Tris-HCl EDTA 氯仿 异戊醇 TE buffer
瓷研钵 离心管 离心机
液氮 CTAB抽提缓冲液 NaAC Tris-HCl EDTA 氯仿 异戊醇 TE buffer
瓷研钵 离心管 离心机
步骤
一、实验试剂及材料
1. 材料：幼嫩的植物材料0.5g左右。
2. 试剂：液氮，CTAB抽提缓冲液：2%CTAB(cetyl trimethyl ammonium bromide， 十六烷基三甲基溴化铵)，1%β-巯基乙醇 1.4mol/L Nacl，20mmol/L EDTA，100mmol/L Tris-Hcl pH8.0，3M NaAC，50mM Tris-HCl pH8.0，20mM EDTA，氯仿：异戊醇（24:1），异丙醇 ，70％乙醇，TE buffer。
二、实验方法
1. 取0.5 g植物材料，双蒸水洗净，并用滤纸吸干。
2. 植物材料剪成1 cm左右碎片，放入预冷的瓷研钵中。
3. 加入液氮速冷，研磨成细粉（越细越好）。
4. 在5 ml离心管中加入抽提缓冲液2.5 mll，60℃保温1小时。
5. 15 000 rpm，离心10分钟。上清转入另一个新的离心管中。
6. 加入等体积氯仿：异戊醇（24:1），混匀抽提至水乳胶融状。
7. 15 000 rpm，离心10分钟。
8. 上清转入另一个新的离心管中。
9. 加入2/3倍体积预冷异丙醇，-20℃保温30 min-1 h，缓缓混匀DNA成絮状折出。
10. 15 000 rpm，离心10分钟，弃上清。
11. DNA沉淀用 70％乙醇洗2次。
12. 加入400 ul TE buffer溶解DNA。
注意事项
真核细胞基因组较大，在操作中应注意动作轻柔，且在低温下进行，以最大限度地减少机械和化学作用对DNA的剪切，从而获得相对完整的DNA。
常见问题
以下几点可能会有所帮助： 1. 坚持使用2-巯基乙醇和PVP； 2. 取幼嫩一点的材料； 3. 低温； 4. 快速； 5. 酚氯仿抽提离心后， 小心吸取上清液， 求质量而不求数量； 6. 压轴的一点技巧， 酚氯仿抽提时尽可能充分混匀。
来源：丁香实验
