🔥 细胞瞬时转染

通过脂质体介导转染法及电转等基因转染技术，将靶基因导入细胞，一般在转染后 48 小时左右，靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的，48 小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。

细胞样品、FuGENE 6 或者脂质体等转染试剂

1. 细胞接种：转染实验前一天接种细胞，各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密度应达到 60%~80%。

2. 细胞转染：采用 FuGENE 6 或者脂质体等转染试剂。在 1.5 ml EP 管中将 FuGENE 6 加入无血清培养基中，混匀后孵育 5 min，然后加入适量 DNA，混匀后孵育 15 min，再轻轻滴入细胞中。

3. 24~48 小时以后鉴定目的基因的表达情况。

1. 转染 24~72 h 后可检测基因表达，如用于重组蛋白、抗体生产等。

2. 由于各实验操作细节可能不同，建议转染前可做优化实验，确定转染试剂与 DNA 的最佳比例。

3. 如果在无血清条件下转染，使用含血清的正常生长培养基进行细胞铺板。在加入复合物前移去生长培养基，替换为 0.5 ml 无血清培养基。

在细胞中加入复合物 24~72 小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色、检测报告基因活性等试验，这依赖于细胞类型和启动子活性。对于构建稳定表达的细胞系，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中，两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。