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超氧化物歧化酶(SOD)活力测定

实验分类:

植物学实验

最新修订时间:

简介

学习和掌握氯化硝基四氮哩蓝(NBT)光化还原法测定SOD活力的方法和原理.。并了解SOD的作用特性。

原理

1. 植物在逆境胁迫或衰老过程中,细胞内自由基代谢平衡被破坏而有利于自由基的产生。自由基是具有未配对价电子的原子或原子团。生物体内产生的自由基主要有超氧自由基(O2-・)、羟自由基(OH・)、过氧自由基(ROD)、烷氧自由基(RO)等。

植物细胞膜有 酶促和非酶促两类过氧化物防御系统,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物 酶(POD)和抗坏血酸过氧化物酶(ASA-POD)等是酶促防御系统的重要保护酶。抗坏血酸 (维生素C)、维生素E和还原型谷胱甘肽(GSH)等是非酶促防御系统中的重要抗氧化剂。 CAT等活性氧清除剂的含量水平以及O2-・、H2O2、OH · 和O2等活性氧的含量水平可作为植物衰老的生理生化指标。

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)是含金属辅基的酶。高等植物含有两种类 型的SoD:Mn-SOD和Cu. Zn-SOD,它们能通过歧化反应清除生物细胞中的超氧自由基 (O2-・),生成 H2O2 和 O2。H2O2由过氧化氢酶(CAT)催化生成H2O和O2。从而减少自由基对有机体的毒害。反应式如下:

由于超氧自由基(O广)为不稳定自由基,寿命极短,测定SOD活性一般为间接方法,并利用各种呈色反应来测定SOD的活力。核黄素在有氧条件下能产生超氧自由基负离子O2-・,当加入NBT后,在光照条件下,与超氧自由基反应生成单甲膳(黄色),继而还原生成二甲腊,它是一种蓝色物质,在560 nm波长下有最大吸收峰。

当加入SOD时,可以使超氧自由基与H+结合生成H2O2和O2,从而抑制了NBT光还原的进行,使蓝色二甲腊生成速度减慢。通过在反应液中加入不同量的SOD酶液,光照一定时间后测定560 nm波长下各液光密度值,抑制NBT光还原相对百分率与酶活性在一定范围内呈正比,以酶液加入量为横坐标, 以抑制NBT光还原相对百分率为纵坐标,在坐标纸上绘制出二者的相关曲线,根据SOD抑 制NBT光还原相对百分率计算酶活性。找出SOD抑制NBT光还原相对百分率为50% 时的酶量作为一个酶活力单位(U)。

来源:丁香实验团队

操作方法

超氧化物歧化酶(SOD)活力测定

学习和掌握氯化硝基四氮哩蓝(NBT)光化还原法测定SOD活力的方法和原理。并了解SOD的作用特性。

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