超氧化物歧化酶（SOD）活力测定

1. 植物在逆境胁迫或衰老过程中，细胞内自由基代谢平衡被破坏而有利于自由基的产生。自由基是具有未配对价电子的原子或原子团。生物体内产生的自由基主要有超氧自由基（O_2^-・）、羟自由基（OH・）、过氧自由基（ROD）、烷氧自由基（RO）等。

植物细胞膜有 酶促和非酶促两类过氧化物防御系统，超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物 酶（POD）和抗坏血酸过氧化物酶（ASA-POD）等是酶促防御系统的重要保护酶。抗坏血酸 （维生素C）、维生素E和还原型谷胱甘肽（GSH）等是非酶促防御系统中的重要抗氧化剂。 CAT等活性氧清除剂的含量水平以及O_2^-・、H₂O₂、OH · 和O₂等活性氧的含量水平可作为植物衰老的生理生化指标。

超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）是含金属辅基的酶。高等植物含有两种类 型的SoD：Mn-SOD和Cu. Zn-SOD,它们能通过歧化反应清除生物细胞中的超氧自由基 （O_2^-・），生成 H₂O₂ 和 O₂。H₂O₂由过氧化氢酶（CAT）催化生成H₂O和O₂。从而减少自由基对有机体的毒害。反应式如下：

由于超氧自由基（O广）为不稳定自由基，寿命极短，测定SOD活性一般为间接方法，并利用各种呈色反应来测定SOD的活力。核黄素在有氧条件下能产生超氧自由基负离子O_2^-・，当加入NBT后，在光照条件下，与超氧自由基反应生成单甲膳（黄色），继而还原生成二甲腊，它是一种蓝色物质，在560 nm波长下有最大吸收峰。

当加入SOD时，可以使超氧自由基与H⁺结合生成H₂O₂和O₂，从而抑制了NBT光还原的进行，使蓝色二甲腊生成速度减慢。通过在反应液中加入不同量的SOD酶液，光照一定时间后测定560 nm波长下各液光密度值，抑制NBT光还原相对百分率与酶活性在一定范围内呈正比，以酶液加入量为横坐标， 以抑制NBT光还原相对百分率为纵坐标，在坐标纸上绘制出二者的相关曲线，根据SOD抑 制NBT光还原相对百分率计算酶活性。找出SOD抑制NBT光还原相对百分率为50% 时的酶量作为一个酶活力单位（U）。