2D 凝胶的蛋白 Edman 测序实验

植物学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

采用聚偏氟乙烯（polyvinylidene difluoride，PVDF )膜的免疫印迹技术是 Edman 测序最常用的方法。通过电转印，蛋白样品从 2D-聚丙烯酰胺（2D-PAGE)凝胶转移到 PVDF 膜上，装载蛋白的这种膜可直接用于蛋白测序。本实验来源「植物蛋白质组学实验指南」〔法〕H.蒂勒门特、M.齐维、C.达默韦尔、V.米琴主编。

来源：丁香实验

操作方法

2D 凝胶的蛋白 Edman 测序

3.1 Cleveland 肽图谱[5] ( 1 ) 样品进行 2D-PAGE 分离，然后用考马斯亮蓝（CBB ) 染色，去除含有蛋白质点的凝胶碎片。 ( 2 ) 用电泳浓缩仪洗脱凝胶中的蛋白质，2W 恒功率洗脱 2 h。洗脱后，再用 MQ 水透析两天，再冻干。 a. 从 2D 胶中切下蓝色蛋白质点，用 MQ 水浸泡。 b. 在装有蛋白质点（含有 5~20 块凝胶碎片）的 2 ml 离心管