双向凝胶荧光染色与成像实验

植物学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

在比较蛋白质组学中关于待测蛋白的数量、蛋白点的准确定量及其与质谱技术的兼容性研究过程中，双相凝胶电泳的染色是至关重要的一步。本章描述了多种与质谱技术兼容的用于凝胶染色的染料：考马斯亮蓝、硝酸银、Sypro Ruby、Deep Purple。本实验来源「植物蛋白质组学实验指南」〔法〕H.蒂勒门特、M.齐维、C.达默韦尔、V.米琴主编。

来源：丁香实验

操作方法

双向凝胶荧光染色与成像

3.1 可溶性总蛋白的提取方法（三氯乙酸/丙酮法） ( 1 ) 从拟南芥细胞悬浮培养液中收集细胞。 ( 2 ) 液氮中研磨细胞。 ( 3 ) 向研磨好的细胞粉末中加入提取液，在 -20℃ 放置至少 30 min ( 见注释 7) 。 ( 4 ) 42000 g 离心以除去不溶物，用洗涤液（见注释 8 ) 清洗 3 次（见注释 8)。 ( 5 ) 将管子放置在空气中使其干燥。 ( 6