甲基化特异性 PCR 实验

实验分类：

遗传学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

用 PCR 来分析 DNA 甲基化的方法可以运用于：（1）对基因组中任何位置的 CpG 甲基化的分析；（2）检测肿瘤患者的基因改变以及介人被印的基因的固定遗传障碍的研究。

来源：丁香实验

操作方法

甲基化特异性 PCR 确定 DNA 甲基化的模式

1.把样品 DNA(达 1ug) 稀释到 1.5 ml 微离心管中的 50ul 水中。如果使用的 DNA 更少（包括从石蜡包被的样品提取的 DAN)，预期的产量少（如很微弱的条带）或者增加循环次数提高产量。准备好阳性和阴性对照 DNA 的稀释液和样品平行进行以下步骤。 2.加入 5.5ul 2mol/L NaOH。37°C，孵育 lOmin。加入 3u1 新鲜配置的 l0mmol

基本方案2 确定甲基化特异性 PCR 产物中 CpG 位点的甲基化

1.在 1.5 ml 管中加入 10ul MSP 产物。加入 15ul 10 X 限制性内切核酸酶和缓冲液，需要的话加 BSA，加水至 150ul。加入 10~20U 适合的限制性内切核酸酶。按照操作手册推荐的条件反应 4~6 h。 2.加入 1ul 10mg/ml 糖苷配糖基（作为载体）和 3 体积冰冻的 100% 的乙醇。-20°C，沉淀 DNA 几小时或过夜，离心 20 min，去上清，用