衣藻的遗传技术(四分体分析) 实验

1. 在含 M 或 TAP 培养基的琼脂平板上生长细胞苔层。配子最容易从成熟但不老的细胞苔层获得。2 周以内的培养物最好，但较老的平板培养物常与一些细胞株一起使用。 2. 用接种环取 1 环细胞，重悬在 1 ml 灭菌蒸馏水中。 3. 光照下 3~4 小时，使配子发生。

1. 在 96 孔皿的 1 个孔中混合基本等量的 mt+ 和 mt- 配子。 2. 光照 2 小时，用相差显微镜或 DIC 显微镜取 1 滴交配混合液分析交配效果。 3. 将 1 滴交配混合液滴到琼脂平板中心。 4. 直接涂布混合液，覆盖约 1/3 表面。

1. 光照 18~24 小时孵育合子。 2. 再强力塑料包装材料包裹平板，再用铝箔封好，放黑暗中至少 5 天。平板可在黑暗中数月保持活力，也不会干燥。如果 5 天后所有合子萌发形成八细胞，将细胞在黑暗处放更长的时间。黑暗孵育更长时间通常会得到更高的四细胞萌发百分率。

1. 打开平板包装，将表面用灭菌的单刃剃刀片刮几次。 2. 平板光照至少 18 小时。 3. 用立体解剖显微镜将合子放到平板上，用纤维光源照亮平板。 4. 用圆头玻璃针，将萌发的四分体的 4 个细胞推压分开大约 5 mm，形成一个圆圈。 5. 平板光照 1 周，使子代长成克隆。定期检查平板有无真菌生长，真菌孢子可能在打开平板进行解剖时进入。用灭菌剃刀片除去真菌污染。 6. 约 1 周后，