血浆凝固酶实验

微生物实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

血浆凝固酶是一种能使含有枸橼酸钠或肝素等抗凝剂的入或兔血浆发生凝固的酶类物质。多数致病性葡萄球菌产生此酶，而非致病菌一般不产生，故测定凝固酶可作为鉴别葡萄球菌有无致病性的重要依据之一。

凝固酶有二种：一种是分泌至菌体外的，称为游离凝固酶（free coagulase），其作用类似于凝血酶原物质，可被人或兔血浆中的协同因子（cofactor）激活变为凝血酶样物质后，使液态的纤维蛋白原变成固态的纤维蛋白，从而使血浆凝固，另一种凝固酶结合于瘡体表面而不释放出来，称结合凝固酶（bound coagulase）或凝聚因子（clumping factor），不需要血浆协同因子的作用，而是直接作用于纤维蛋白原，便之变成纤维蛋白，将细菌凝聚在一起。

游离凝固酶采用试管法检测，结合凝固酶则以玻片法测试。

来源：《微生物学实验（第三版）》

来源：丁香实验

操作方法

玻片法

1. 取干净载玻片一块，用滴管取生理盐水于玻片两端各放一小滴。2. 用接种环取金黄色葡萄球菌菌苔少许轻轻搅匀于玻片左侧的盐水中，同法取白色葡萄球菌榭匀于玻片右侧的盐水中。制成均匀浓厚悬液，并观察细菌有无自凝现象。3. 在玻片左右二侧菌液中各加兔血浆 1 滴，轻轻摇匀。4. 于 1 ml 内观察结果，若细菌凝集成颗粒状时为凝固酶阳性。凝集速度取决于细菌和血浆浓度的比例，若使用稀释的血浆，阳性反应速度

试管法

1. 取干净小试管 3 支，依次编号，毎管加入 1：4 的兔血浆 0.5 ml。2. 于第 1、2 管中分别加入金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌菌液 0.5 ml，第 3 管加入 0.5 ml 的无菌肉汤。轻轻转动（不要摇动）试管混匀。3. 将各管置 37 ℃ 水浴中，每隔 30 min 观察一次，于 3 h 内凝固者为阳性。观察时不要振动或摇动试管。因凝固初期的凝块易破坏，即使继续孵育亦不再形成凝块