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透射电镜超薄切片和染色实验

实验分类:

微生物实验

最新修订时间:

简介

超薄切片技术 (Ultramicrotomy)是为透射电镜观察提供薄标本的专门技术,是生物学中研究细胞、组织超微结构最常用的技术,也是生物学中其它电子显微技术,如电镜放射自显影、电镜酶细胞化学以及免疫电镜技术等关键性的技术。目前有关生物体的各种细胞、组织的超微结构知识几乎都是这种技术所提供的。使用该技术观察研究病毒标本,既能看清病毒内部的微细结构,还能观察到病毒与宿主细胞的关系,但对宿主细胞引起的超微形态的改变以及病毒对宿主细胞的吸附、进入宿主细胞、在宿主细胞内的增殖复制等机理的研究,都需将宿主动物的组织或培养细胞制作成超薄切片后才能用透射电镜观察。

厚度在 10-100 nm 的切片称为超薄切片。制作这种切片的技术称超薄切片技术,包括取材、固定、漂洗、脱水、浸透、包埋聚合、切片、染色等一系列极其繁杂的过程,与光镜的石蜡切片相比较,其操作要求更为严格。其中,取材、固定和染色是这一技术的重要环节。来源:《病毒学检验》

来源:丁香实验

操作方法

基本方案

1. 取材 对一般的动物组织取材的要求如下:(1) 标本材料要新鲜,取材速度要快:由于生物组织离体后,细胞将会立即释放出各种水解酶而引起细胞自溶,使其微细结构发生改变而产生假象,故要尽量保持材料的新鲜,经解剖、手术或活检取材后迅速投入固定液内,以尽量保持细胞在活体状态的结构。(2) 取材小,取材部位要准确:由于用于电镜标本制备的固定液其渗透速度极慢,同时超薄切片的面积又很小,一般取材不超过 0.5

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