病毒透射电镜病毒标本制备实验

悬液应尽量除去杂质如培养基残渣，细胞碎片、糖类及各种盐类的结晶等，这些杂质的存在会干扰染色及电镜观察。用该法的缺点是由于电子穿透能力很弱，只能观察病毒的外貌，无法见其内部结构，如果要观察其内部结构则必需进行超薄切片。悬滴标本还必须注意悬液标本的浓度，浓度太稀，则在电镜下寻找极为困难。浓度太浓，会因标本的堆集而影响观察。因此在制样时，最好同时选择几种不同浓度进行滴样，挑选合适浓度的铜网进行观察。

负染色法主要有两种：(1) 悬滴法：用一根细滴管或结核菌素注射器吸一滴标本悬液滴在有膜的铜网上，如带膜铜网已从滤纸上取下，则此铜网很可能被吸到加标本的吸管头上或注射器针头上，铜网上也可能被翻转而污染，故采用悬滴法时，应将带膜铜网粘附于滤纸上，切不可取下。铜网滴上标本后静置片刻，然后用滤纸从铜网边上吸去多余的标本悬液，未待标本干燥即滴上负染色液。染色 1~2 min, 用滤纸吸去多余染液，再用蒸馏水

将抗病毒血清分别稀释为 1: 200~1: 6 400, 然后将不同稀释度的抗病毒血清分别滴于蜡盘或蜡纸上，将有膜铜网覆盖漂浮于液面上（室温 18~20℃) 孵育 5 min, 然后再将铜网移至病毒悬液中漂浮室温反应 15min, 取出铜网吸干，用蒸馏水漂洗 1-2次，再用 1%-2%磷钨酸染 3-5 min, 用滤纸吸去负染液，干燥后电镜检查，其病毒的检测率要比一般悬滴法为高。

为了进行天花、水痘、疱疹等病毒的临床快速诊断，可用毛细吸管直接刺入病人皮肤疱疹内吸取少量泡液，立即滴于有膜的铜网上，稍干后即用 1%-2% 的磷钨酸溶液进行负染，待干后立即用电镜观察。于电镜下常可于短时间内发现典型的病毒颗粒。