细菌透射电镜样品制备实验

微生物实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

透射电镜样品的制备方法很多。其中滴液法，或在滴液法基础上发展出来的其他类似方法如直接贴印法、喷雾法等主要被用于观察病毒粒子细菌的形态及生物大分子等。由于生物样品散射电子的能力很低，所以通常还须采用重金属盐染色或金属喷镀等方法来增加样品的反差，提高观察效果。负染色法由于操作简单，目前在进行透射电镜生物样品制片时比较常用。

本实验将主要介绍采用滴液法结合负染色技术观察细菌的形态。

内容来源于《微生物学实验（第三版）》

来源：丁香实验

操作方法

基本方案滴液法＋负染法

1. 将适量无菌水加入生长良好的细菌斜面内，用吸管轻轻拨动菌体制成菌悬液参用无菌滤纸过滤，并调整滤液中的细胞浓度为 108～109 个/毫升。2. 取等量的上述菌悬液与等量的 2％的磷钨酸钠水溶液混合，制成混合菌悬液。3. 用无菌毛细吸管吸取混合菌悬液滴在铜网膜上。4. 经 3～5 min 后，用滤纸吸去余水，待样品干燥后，置低倍光学显微镜下检查，挑选膜完整、菌体分布均匀的铜网。有时为了保持菌体

辅助方案固定

1. 将用无菌水制备好的菌悬液经过滤，然后向滤液中加几滴固定液（如 pH 7.2，0.15％的戊二醛磷酸缓冲液）。2. 经这样预先稍加固定后，离心，收集菌体，制成菌悬液，3. 再加几滴新鲜的戊二醛，在室温或 4 ℃ 冰箱内固定过夜。4. 次日离心，收集菌体，再用无菌水制成菌悬液，并调整细胞浓度为 108～109 个/毫升。5. 按基本方案所述方法染色。