酵母细胞质粒分离实验

实验分类：

微生物实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

在非选择性生长条件下，大多数大肠杆菌/酵母菌穿梭载体的丟失频率大约1%，采用本方案不易分离除去的一个质粒是内源性2 μm 质粒，2 μm DNA自发丢失的频率约为每代10^-4。

来源：丁香实验

操作方法

基本方案

1. 挑取几个含质粒的酵母宿主菌菌落，接种于10 ml 非选择性培养基，于30℃培养过夜。 2. 在非选择性平板上于30℃培养2天以得到单菌落，大多数情况下，可以得到约200~300个单菌落（约每平板100个菌落）。 3. 通过影印到选择性平板上以确定丢失了质粒选择标志的菌落，于30℃培养过夜，那些可在主平板上生长的但不能在选择性平板上生长的菌落丢失了质粒。