由酶循环确定烟酰胺核苷酸实验

实验分类：

生物化学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

烟酰胺核苷酸可以作为脱氢酶的底物被测定（特别是 LDH，ADH 作用于 NAD^＋和 G6PDH 作用于 NADP^＋），根据各自的吸收系数可以利用酶循环的方法在低浓度下被测定。

来源：《酶学实验手册》

来源：丁香实验

操作方法

NADP（H）的测定

实验所需「试剂」具体见「其他」1. NADP 或 NADPH 的测定0.1 ml 循环混合物：被测定的 x ul NADP 或 NADPH 溶液［x 为 1～20；浓度为（3～50）×10-9 mol/L］。（20～x）ul 0.1 mol/L Tris-HCl，pH 8.037 ℃ 培养 30 min将样品转移到 100℃、2 min 来终止反应。2. 6-磷酸葡萄糖酸盐的荧光测定在发射 47

NAD（H）的测定

实验所需「试剂」具体见「其他」0.1 ml 循环混合物被测定的 x ul NAD 或 NADPH 溶液［x 为 1～20；浓度为（3～50）×10-9 mol/L］。（20～x）ul 0.1 mol/L Tris-HCl，pH 8.037℃ 培养 30 min 将样品转移到 100℃、2 min 来终止反应，接着将样品转移至冰浴每个样品中加入 0.1 ml 溶液 II，25℃ 孵育 15 min