用非同位素探针进行原位杂交和检测实验

1a)石蜡切片或细胞的杂交，对载玻片进行脱蜡、水化、 封闭和脱水处理。将标本晾干（或在干燥器中干燥），随后储于加有干燥剂的载玻片盒中，置-70℃过夜。至关重要的是标本在储放前应绝对干燥。1b)冰冻切片的杂交：进行切片的预处理和乙酰化处 理，随后进行切片的脱水。标本绝对干燥至关重要，此时切片即可用于杂交（步骤3)。杂交应马上进行。2) 对每一杂交实验，可用乙醇沉淀10〜15 ng探针，重溶于10μL

1) 用生物素酰化探针与切片进行杂交、洗涤，进行第一轮杂交信号检测。对生物素酰化探针信号的放大，可在基本方案步骤8之后的任何一步进行。2) 如果切片已加盖玻片并密封，可用一针头或解剖刀片划开密封的指甲油，移去盖玻片，并除去载玻片上指甲油。将玻片浸于盛有 0.1% Triton ×-100/4×SSC的，以铝箔包裹的Coplin广口瓶15 min,轻轻摇动。如盖玻片不易松动，应小心抬起，重复洗涤2次

1) 用地高辛标记的探针与切片杂交并洗片。2) 加50μL 10 /ng/ml的羊抗地高辛抗体Fab片段于玻片上，盖以22 mm2大小的Para- film 膜，置 37℃温育 30 min。3) 移去Parafilm 膜，分别在 4×SSC、0.1 % Triton×-100/4 ×SSC、4×SSC 中洗片， 每次15 min。4) 吸去残余4×SSC，加50μL地高辛信号放大溶液于玻片上，盖