荧光共定位

实验分类：

其他实验

最新修订时间：2023-06-21

简介

暂无

原理

将自噬体和线粒体特异性蛋白的基因与荧光蛋白基因连接起来构成融合基因，导入细胞内表达，借助荧光显微镜或者共聚焦显微镜对标记蛋白进行细胞内活体跟踪，可对自噬体和线粒体进行共定位可视化分析。

应用

观察线粒体自噬的动态变化。

来源：实验室

操作方法

自噬体与线粒体免疫荧光共定位

1、铺板：取对数生长期的细胞胰酶消化后铺 12 孔板，铺板量以次日转染时达到 70~80% 左右为宜。2、转染：准备两个 1.5 mL EP 管，分别加入 50 μL 无血清培养基，一管加入适量的 EGFP-LC3 和 DsRed-mito 质粒，另外一管加入 3 倍体积的 PEI 转染试剂（DNA 质粒量: PEI = 1:3），室温静置 5 min 后，将两个 EP 管里面的液体混合，室温静置