整合型载体介导的基因导入技术

其他实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

基因载体的改良推动无遗传修饰ips细胞的建立。早期使用的病毒载体，如逆转录病毒载体、慢病毒载体。可用于：（1）通过载体介导，控制目的疾病基因的表达,抑制、校正、替代或补偿缺陷或异常。（2）慢病毒载体不但可以感染非分裂期细胞还具有容纳外源性目的基因片段大，免疫反应小的优点，对基因诊断和基因治疗有着广泛的研究。

来源：丁香实验

操作方法

逆转录病毒载体介导法

1. 转染前，10cm培养皿中接种大约10%——20%皿底面积的包装细胞。2.将10μg含抗药基因的逆转录病毒质粒DNA加入0.5mL HeBs中，加入32μL 2mol/LCaCL2,轻振动，加盖30分钟，室温下培养45分钟，直到小的、模糊的兰色沉淀产生。3. 从包装细胞中弃去旧液，轻轻滴入HeBs-DNA沉淀于细胞培养皿中心，使细胞接触DNA20分钟，每10分钟轻轻摇动培养皿，使溶液均匀，加入