磷酸交联 AFFI-GEL 10 亲和介质实验

实验分类：

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本实验描述了将磷酸肽链/非磷酸肽链和磷酸酪氨酸交联到 Affi-Gel 10 亲和介质上以利用亲和柱层析法纯化抗体的方法。

来源《精编分子生物学实验指南（第五版）》

来源：丁香实验

操作方法

肽链交联

1. 用 0. 5～4 倍柱床体积的 DMSO 溶解肽。2. 如下滴定中和肽溶液：每次滴加 1～2 μl 肽合成级的 N-甲基吗啉（原液或以 1:1 至 1:9 稀释于 DMSO 中），然后取出 2～3 μl 稀释于50 μl 水中，滴加到 pH 试纸上。重复上述操作直至 pH 为 7～8。滴定要仔细，因为很容易超过所需的 pH 范围。一般每 3 μmol 肽需要用 7～8 μl N-甲基吗啉滴定

磷酸酪氨酸交联

1. 用 0.5～4 倍柱床体积的 0.4 % 碳酸氢钠溶解磷酸酪氨酸。2. 用 pH 试纸检查 pH 是否在 7～8 的范围内。如果需要调节 pH，用滴定的方法来进行中和，即加入少量的 1 mol/L NaOH，吸取 2～3 滴到 pH 试纸上测量，重复上述操作直到 pH 为7～8。3. 将装有 Affi-Gel 10 介质的瓶子摇荡混合以使树脂充分悬浮，取需要量的树脂转移到连有真空吸液器的多孔