包涵体蛋白质的溶解及复性实验

虽然包涵体是表达蛋白非天然形式的混合物，但是其肽链本身是完整的，或者说一级结构是正确的。从包涵体纯化表达蛋白的一个优点是包涵体易于与细胞其他成分分离。一般的水溶液很难溶解包涵体，只有在变性剂（如盐酸胍、脲）溶液中才能很好溶解。这时，溶解的包涵体蛋白获得完全变性，即除一级结构和共价键保留外，所有的氢键、疏水键全被破坏，疏水侧链完全暴露。然后，在一定条件下除去变性剂促使产物蛋白完成正确的蛋白折叠过程，获得天然结构，该过程称为复性。蛋白质复性是十分复杂的过程，目前采用的方法主要有两种。一种是稀释溶液，便溶液中变性剂浓度逐步降低，蛋白质开始复性。此法简单易行，但操作的液量体积有时过大，同时也降低了蛋白质的浓度。另一种是透析、超滤或电渗析除去变性剂。透析法经常用于实验室，溶液对水或缓冲液透析，变性剂透过膜扩散浓度逐渐降低，蛋白质获得复性。该法液量总体积和蛋白质浓度变动不大，但时间较长，有时会形成蛋白质沉淀。

来源《蛋白质技术手册》

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