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谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白的表达及纯化实验

实验分类:

蛋白质实验

最新修订时间:

简介

pGEX载体可用于表达和纯化用作免疫原和生化、生物试剂的多肽(包括短肽),或用cDNA构建表达文库。每个pGEX载体都有一个编码谷胱甘肽S-转移酶的开放阅读框,其后有单一限制性内切酶位点,然后是相应于三个阅读框的终止密码子。

来源:丁香实验

操作方法

基本方案

1. 按正确读框将DNA片段亚克隆入合适的pGEX载体中,转化大肠杆菌感受态细胞, 在LB/氨苄青霉素平皿上筛选转化子,以不插入外源DNA的自连载体作对照,平皿置37℃孵育12~15 h。 2. 挑取转化菌落接种于2 ml LB/氨苄青霉素培养基,并在氨苄青霉素主平板上划线培养。同时接种含母本pGEX载体的转化菌作对照。将主平板于37℃下温育12~15 h。液体培养物则于37℃摇床中

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