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简介
在适宜的条件下,T7 RNA聚合酶/启动子系统表达的基因产物可占细胞总蛋白的25%以上,但多数情况下产量比这个比例要低得多。
来源:丁香实验
操作方法
1. 将含有待表达基因的片段亚克隆于pT7-5、pT-6或pT7-7中,转化一种标准大肠杆菌菌株,此菌株不应带有可指导T7 RNA聚合酶合成的质粒。转化物涂布于氨苄青霉素平皿,于37℃温育培养过夜。 2. 挑取独立的转化菌落于LB/氨苄青霉素培养基中,37℃培养,通过小量制备方法获得质粒DNA。以限制性酶谱分析确证基因正确插入与否。 3. 从pGP1-2转化大肠杆菌K38株涂
备选方案1. 将含有待表达基因的片段亚克隆于pT7-5、pT-6或pT7-7中,转化一种标准大肠杆菌菌株,此菌株不应带有可指导T7 RNA聚合酶合成的质粒。转化物涂布于氨苄青霉素平皿,于37℃温育培养过夜。 2. 挑取独立的转化菌落于LB/氨苄青霉素培养基中,37℃培养,通过小量制备方法获得质粒DNA。以限制性酶谱分析确证基因正确插入与否。 3. 从pGP1-2转
备选方案21. 制备从M13噬菌体mGP1-2原种,加PEG溶液沉淀浓缩噬菌体。重悬噬菌体于M9培养基,滴定其滴度。 2. 将由“基本方案”步骤1所得的含T7 启动子表达质粒转化M13许可性大肠杆菌细胞,转化物涂布于氨苄青霉素平皿上,37℃培养过夜。挑取独立转化菌落,接种于LB/氨苄青霉素培养基中,37℃温育过夜。 3. 将过夜培养物以1:100比例稀释于LB/氨苄青霉素培养基中,37℃
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