蛋白质的微量测序分析实验

实验分类：

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

当前，所谓蛋白质测序，主要指的是蛋白质的一级结构的测定。蛋白质的一级结构（Primary structure）包括组成蛋白质的多肽链数目。很多场合多肽和蛋白质可以等同使用。多肽链的氨基酸顺序，它是蛋白质生物功能的基础。

来源：丁香实验

操作方法

基本方案1

1. 制备分离胶和积层胶溶液灌制变性微型凝胶。 2. 组装垂直凝胶电泳装置。 3. 将80 ml 4×凝胶缓冲液稀释至320 ml。将200 ml 1×凝胶缓冲液倒入下层缓冲液槽。 4. 剩余的1×凝胶缓冲液加入还原型谷胱甘肽（干粉）至终浓度1 mmol/l，将它们倒入上层缓冲液贮槽。将凝胶连接于恒压/恒流电源。 5. 10 mA 下预电泳45 min。

测定N-末端封闭蛋白质的内部序列

1. 电泳分离目标蛋白并转移到硝酸纤维素膜。 2. 将硝酸纤维素膜放入盛有50 ml 含0.1%丽春红S料的1%乙酸水溶液的经酸洗的petri 玻璃培养皿。轻轻摇动1 min。 3. 将膜移入1%乙酸1 min，如有需要，换液至条带显迹清晰。 4. 穿带无粉尘手套用刀片将目标蛋白条带切下，小心切去多余的硝酸纤维素膜后，放入微量离心管中，取一片空白膜作对照。