RNA 在脊椎动物的胚胎和器官中的整体标本原位杂交和检测实验

实验分类：

RNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

转录的时空分布（如胚胎发生过程中）情况可以为研究编码基因产物的功能及与其他基因之间可能的相互作用提供重要的线索。来源：《精编分子生物学实验指南》第五版

来源：丁香实验

操作方法

小鼠或者鸡的胚胎以及器官中的整体原位杂交

1) 如果有必要的话，在冰冷的PBS溶液中，使用合适的解剖器具在解剖镜下将小鼠或鸡的胚胎切成小块。完全除去胚胎外膜和胞衣。打开腔。2) 将样本转移到装有10 ml左右冷的4%多聚甲醛的20 ml咬合盖玻璃小瓶中。4℃固定4 h到过夜。3) 4℃下用PBT洗样本两次。即使样本不做存储立即使用，也建议进行脱水、水化和漂白步骤（步骤4〜8)，这些步骤可以改进组织的浸透性并且增加方法的灵敏度。也可以选择

小鼠胚、鸡胚或者器官中RNA杂交的酶学检测

1) 从杂交过的小鼠胚或鸡胚或器官样本移除杂交溶液并加入800μL预杂交溶液A， 7℃洗 5 min。2) 不要移除预杂交溶液，向试管中再加入400μL 2×SSC, pH 4.5溶液，70℃洗 5 min,重复加2×SSC2次，并再洗2次。3) 移去混合液，并在0.1% CHAPS/2×SSC中70℃洗两次，每次洗30 min。4) 用含有20μg/ml RNA 酶 A 的 0.1% (V/V)

非洲爪蟾的整体原位杂交

1) 在2%半胱氨酸，pH 7.8的溶液中培养非洲白化爪蟾的胚胎3〜10 min以除去胚胎外的胨胶层。2) 将胚胎转移到5 ml螺旋盖玻璃小瓶中，等胚胎沉淀后，移去大部分的液体，并向小瓶中加入MEMPFA缓冲液。室温下培养30 min并轻轻摇晃以固定胚胎。3) 用PBS取代MEMPFA缓冲液室温下洗3次，每次30 min。4) 依次用50%、70%和100%甲醇室温下使样本脱水，每种溶液浸泡10