哺乳动物细胞体外剪接分析实验

RNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

剪接反应的典型做法是使用核提取物，即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组分，最常使用的是 HeLa 细胞的提取物。前体 mRNA 底物通常采用噬菌体聚合酶体外转录的方法来制备。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。

来源：丁香实验

操作方法

哺乳动物细胞体外剪接分析实验

一、材料与设备所有的试剂应该用高质量的高压灭菌水配制，例如 Milli Q（Millipore，Bedford，MA，USA）纯化或双蒸馏水。所有化学试剂应该是超纯级别的或专门用于分子生物学制备的级别。由于体外剪接分析涉及 1015 摩尔级的 RNA，应该特别小心，以避免核糖核酸酶污染。 1. 前体 mRNA 底物底物由线性化质粒体外转录制备，将目的基因或它的一部分克隆到质粒的噬菌体启动