引物延伸法 RNA 分析

RNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

引物延伸法可用于 RNA 的作图和 RNA5＇端的定暈。在此方法中，将过量的 5＇端标记的单链 RNA 引物与待测的 RNA 杂交，随后用反转录酶延伸该引物，生成句 RNA 模板互补的 cDNA。再在变性条件下通过聚丙烯酰胺凝胶电泳测定 cDNA 的长度，即可确定 RNA 端的位置，并且 cDNA 的量将反映出 RNA 的水平。

来源：丁香实验

操作方法

引物延伸法 RNA 分析

一、材料与设备 1) 水浴 2) 杂交炉 3) 电泳设备 4)T4 多核苷酸激酶，AMV 反转录酶 5)10X 激酶缓冲液：5mol/LTris-HCl(pH7.6)，0.lmol/LMgCL2，50 mmol/LDTT，lmmol/L 亚精胺.1 mmol/LEDTA 6)5X 杂交缓冲溶液；2 mmol/LNaCl,50 mmol/LPTPES(pH6.4) 7)1X 延伸溶液：