钳制 PCR

PCR 技术

别名：

PCR clamping

最新修订时间：2022-02-10

简介

钳制 PCR，英文名是 PCR clamping，钳制 PCR 能够快速地检测到基因中的单个碱基突变，这对于基因诊断以及药物遗传学具有重要意义。钳制 PCR clamping 包括 PNA(peptide nucleic acids) 和 LNA(locked nucleic acids) 介导的两种。PNA 和 LNA 均为核酸类似物，它们可以高度亲和并特异地与 DNA 或 RNA 结合。

目前，用于钳制 PCR 的方法主要有 1 种：PNA 介导的钳制 PCR。

原理

钳制 PCR 的基本原理：

检测基因中是否存在突变时，采用两条竞争性引物，一条是与野生型互补的 PNA 引物，一条是与突变型互补的 DNA 引物。当基因未发生突变时，PNA 引物与靶序列结合的能力高于 DNA 引物，而在 PNA 结合靶序列后，由于 PNA 不能通过 DNA 聚合酶而延伸，从而不能引起片段的扩增；当基因中存在突变时，DNA 引物与靶序列的结合强度高于 PNA 引物，产生扩增片段。PNA 引物也可以位于突变引物的下游或者是扩增片段的内部，当 PNA 与靶位点结合后，也能阻止扩增反应的进行。

应用

钳制 PCR 的常用应用领域如下：

（一）检测突变

（二）微生物多样性分析

（三）转基因植物的监测

（四）食品来源的探究

来源：丁香实验团队

操作方法

PNA 介导的钳制 PCR

PNA 介导的钳制 PCR，英文名是 peptide nucleic acids PCR clamping。PNA（肽核酸）是一种以中性酰胺键为骨架并兼有多肽和核酸性质的独特化合物。PNA 与互补的 DNA 或 RNA 序列杂交具有极强的特异性和热稳定性；PNA 不易被蛋白酶和核酸酶降解；PNA/DNA 杂交结合强度与盐浓度无关。