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融合 PCR 实验

实验分类:

PCR 技术

最新修订时间:

简介

融合 PCR 是通过 PCR 的方法,将两段 DNA 序列连接到一起,处于相邻位置。一般来说, 融合 PCR 设计的引物序列的 5』端和 3'端各包含一段待融合的模板序列,这条引物相当于衔接头,将两段 DNA 序列连接到一起。融合 PCR 技术最常用于全长序列的拼接,现在随着技术的发展,逐步应用于基因的破坏、基因的标记、序列缺失、两种基因的融合等领域。

原理

融合 PCR 实验的基本原理是通过在上游引物的 5』端添加一段帽子序列,这 段帽子序列与靶 1 序列同源;而此引物的 3』端序列与靶 2 序列同源。这样,在第一个 PCR 反应中,以靶 2 序列为模板,使靶 2 序列得到扩增,而 扩增产物均携带与靶 1 序列同源或互补的序列。然后,以这样的扩增产物为引物,在第二个 PCR 反应中,以靶 1 序列为模板,使靶 1 序列得到扩增。这样得到的产物既含有靶 1 序列,又含有靶 2 序列,成为一段长片段的融合序列(见图 10-5)

来源:丁香实验团队

操作方法

🔥 融合 PCR

融合 PCR 是通过 PCR 的方法,将两段 DNA 序列连接到一起,处于相邻位置。一般来说,融合 PCR 设计的引物序列的 5' 端和 3' 端各包含一段待融合的模板序列,这条引物相当于衔接头,将两段 DNA 序列连接到一起。融合 PCR 技术最常用于全长序列的拼接,现在随着技术的发展,逐步应用于基因的破坏、基因的标记、序列缺失、两种基因的融合等领域。

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