用 PCR 分析连接反应的底物和产物

PCR 技术

最新修订时间：2022-02-10

简介

由 PCR 产生的合成 DNA 文库，可以经过酶切消化，连接到线性化的表达载体系统上。在这里所列的方案中，文库的 5’（NotⅠ）和 3'(ClaⅠ) 末端是不同的酶切位点，也用同样的酶切位点克隆进载体。可以用 PCR 分析线性化反应和连接反应的效率。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

来源：丁香实验

操作方法

用 PCR 分析连接反应的底物和产物

一、材料 1. 缓冲液、溶液和试剂 ddH2O 2. 酶和酶缓冲液 10X Vent 缓冲液 Vent DNA 聚合酶 3. 核酸和寡核苷酸 dNTP，各 20 mmol/L 引物，可以与合成的 DNA 文库克隆位点两侧的载体序列退火质粒 DNA(见下面第 1 步） 4. 特殊设备琼脂糖凝胶电泳所需的试剂和设备，包括溴化乙锭热循环仪二、方法 1.混合以下组分。