实时 PCR 的参数实验

PCR 技术

最新修订时间：2022-02-10

简介

LUX 引物用 FAM(6-羧基荧光素）或 JOE(6-羧基-4'，5'-二氯-2'，7'-二甲氧基荧光素）标记。在没有特异模板的反应中，LUX 引物可以对 100 个拷贝或更少的目的基因进行定量，定量范围可以从不足 100 到 10⁷ 个拷贝。运用 FAM 和 JOE 标记的引物，提供的检测平台可以同时检测两个基因。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

来源：丁香实验

操作方法

实时 PCR 的参数实验

一、方法 1. 引物实时 PCR 的引物必须具有基因的特异性，并能进行较短片段的扩增。 a.LUX 引物设计软件（LuxDsigner) 缺省的参数已经被设定为可以扩增 75~200bp 长度的片段，引物退火温度范围为 60~68°C, 在设置 PCR 程序时，退火溫度为 55~64°C 比较合适。该软件设置的参数可以使引物自身互补或引物间形成二聚体的可能降到最低。运用该软件进行引物设计，