毛细管电泳法分析单链构象多态性实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

单链构象多态性（SSCP) 是最常用的突变检测方法之一。应用毛细管电泳法，通过 DNA 在非变性聚合物中被分离，可以区分野生型和突变型 DNA 片段。通过给每条链贴上不同的标签可以区分两条链。构象是蕰度决定的，因此，凝胶电泳时要在不同的温度下以实现一个高敏感性。

来源：丁香实验

操作方法

基本方案1 毛细管电泳的样品准备

基本方案2 应用 ABI 310基因分析仪的自动化毛细管电泳

1.将 PCR 管放在样品槽上。参照制造商的说明书将 ABIPRISM 基因分析仪调至正常状态。安装一个 5 um i.d. 的基因分析仪毛细管，使距离探头 36 cm。在吸管里装上 5% 非变性引物，并且在缓冲腔内加人以基因分析仪缓冲剂。准备样品板。如果在 5% 非变性引物中使用了 TBE 缓冲剂，那么必须用 1 X TBE 代替 1 X 基因分析仪缓冲剂。 2.在 15°C、25°C 和

基本方案3 应用ABI PRISM 3100基因分析仪的自动化毛细管芯片电泳

1.安装一个 16 通道的芯片（50 cmi.d.) 使之与探头距离 36 cm。根据制造商说明书将设备做好正常运行的准备。吸管内吸入 5% 非变性引物，在缓冲腔内注人 IX 基因分析仪缓冲剂。准备样品板。将管放入样本槽。 2.在 18°C、25°C 和 35°C 运用三种运行组件运行毛细管电泳，使用以下参数。加入时间：IOs 加入电压：3kV 运行电压：53kV 运行时间：25 mi