研究染色体水平的 DNA 损伤是遗传毒理学的重要组成部分,因为染色体突变是癌症发生过程中重要的一环。微 核 实 验(micronucIeus assay) 因为能准确检测染色体丢失和染色体断裂而被认为是评价染色体损伤的最佳方法之一。由于微核只出现在完成细胞核分裂的细胞中,可使用一种微丝聚合抑制剂松胞菌素 B (cytochalasinB ) 阻止胞质分 裂(cytokinesis) 的方法从而根据其双核现象鉴定这类细胞。这种胞质分裂阻滞微核实 验(cytokinesis-blocked micronucleus, C B M N ) 有较好的精确性,因为获得的数据不会被由细胞毒性试剂或者非理想的细胞培养条件引起的细胞分裂动力学改变所混淆。这种方法现在已被用于多种细胞以检测群体中的遗传损伤,筛检化学物的潜在遗传毒性和其他特殊目的如预测肿瘤对放射的敏感性和个体间对放射的敏感性差异。应用目前的基本研究方法,通过简单的形态学标准, CBMN 实验能够用于以下检测:染色体断裂、染色体丢失、染 色 体 重 组(nucleoplasmic b rid g e , 核质桥)、 基 因 扩 増(nuclear bud,核芽)、细胞分裂阻滞、坏死和凋亡。用阿糖胞苷改良的 CBMN 实验能够检测切除修复损伤。通过分子探针的使用可将染色体断裂和染色体缺失区分,更重要的是能探测到非微核双核细胞中的不分离(nondisjunction) 染色体。因此 CBMN 技术可在一种相对简单的体系中完成多重和互为补充的遗传毒性和细胞毒性的测量。本章将阐述 CBMN 实验的基本原理和方法(包括详细的所有的遗传毒性和细胞毒性指标的评分标准)以及发展应用前景。
作者:马丁,本实验来自「环境基因组学实验指南」
微核实验在染色体水平检测DN A损伤实验
一、材料
1. 胞质分裂阻滞微核试验
2. 微核的着丝点检测
(1)从硬皮病 C R E S T 亚型的患者中取得的血清样本。
(2) F I T C 标记的兔抗人 I g G 二抗。
(3) 过氧化物酶标记的兔抗人 I g G 。
(4) 二胺基联苯溶液(D A B ): I m g /m L 溶于 0. 5 mol/L Tris 碱