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培养神经元原位杂交技术实验

实验分类:

DNA 实验

最新修订时间:

简介

原位杂交(inhybridization,ISH) 的目的是在细胞结构内显 TKmRNA 分子。在 ISH 步骤中要采用高温,这就对细胞的固定有特殊要求。如果原位杂交方法不能提供阳性的杂交信号,还可以应用其他的技术,如通过 mRNA 扩增来检测神经突起微小区域内的低丰度 mRNA 的存在(Miyashiroetal.1994)。

现代神经科学研究技术
作者:U.Windhorst & H. Johansson  翻译:赵志奇 陈军

来源:丁香实验

操作方法

培养神经元原位杂交技术实验

一、制备地高辛标记的探针 将 cDNAs 克隆入 pBluescript 载体中。为了能在体外转录,质粒需经线性化或 PCR 然后根据插入 cDNA 的方向应用 T3 或 T7RNA 聚合酶合成反义 RNA 探针。体外转录之后,DNA 模板用 DNA 酶 I(无 RNA 酶)降解,cDNA 水解成大约 200 个核苷酸的片段。 质粒的线性化:用合适的限制性内切酶在紧邻插入

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