含5’突出羟基端的 DNA 分子磷酸化

实验分类：

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本方案用磷酸酶去除核酸的 5' 磷酸根，然后在 T4 噬菌体多核苷酸激酶的催化下，以放射性标记的形式重新将磷酸加到核酸上，这是一种广泛应用于 ³²P 标记探针的技术。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

含5’突出羟基端的DNA分子磷酸化

一、材料 1. 缓冲液和溶液乙酸铵（10 mol/L) EDTA ( 0.5 mol/L，pH 8.0 ) 乙醇 2. 酶和缓冲液 T4 噬菌体多核苷酸激酶 10X T4 噬菌体多核苷酸激酶缓冲液 3. 核酸和寡核苷酸 DNA (10~50 pmol) 4. 放射性复合物 [γ-32P] ATP ( 10 mCi/ml，比活性为 3000~7000 Ci/mmol） 5.