应用混合寡核苷酸引物引导的cDNA扩增（MOPAC）

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

对于仅仅知道某种蛋白质的部分序列，而要克隆其基因的最佳方法是，利用已知氨基酸序列设计相应的寡核苷酸，用此寡核苷酸作为探针去筛选基因文库钓取全长基因或者用寡核苷酸作为引物进行 PCR 扩增靶基因。这两种方法都会遇到寡核苷酸所编码的遗传密码子的简并性问题。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

应用混合寡核苷酸引物引导的cDNA扩增（MOPAC）

一、材料 1. 缓冲液与溶液 10X 扩增缓冲液 4 种 dNTP 贮存液（20 mmol/L，pH 8.0 ) 2. 酶与缓冲液热稳定 DNA 聚合酶 3. 凝胶聚丙烯酰胺凝胶 4. 核苷酸与寡核苷酸 DNA 模板（100 μg/ml，基因组 DNA 或 cDNA 基因文库）溶于 TE 中（pH 8.0) 反义寡核苷酸库（10 μmol/L）溶于 TE 中（pH 8.0)