PCR 产物的平末端克隆

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

靶基因经 PCR 扩增，样品进行必要的纯化回收后，接下来用平末端进行连接克隆也是分子生物学实验中常规采用的技术路线，实验一般利用噬菌体 T4 DNA 聚合酶等补平扩增 DNA 片段的末端（Weiner 1993; Chuang et al. 1995)。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

PCR产物的平末端克隆

一、材料 1. 缓冲液与溶液 10 mmol/L ATP 2 mmol/L dNTP 溶液（含四种 dNTP） 10X KGB 广域缓冲液（1 mol/L 乙酸钾，250 mmol/L Tris-acetate ( pH 7.6 )，100 mmol/L MgAc ( 含四水化合物），5 mmol/L β-巯基乙醇，100 μg/ml 牛血清白蛋白） 2. 酶与缓冲液噬菌体 T4 D