用引物延伸法进行 RNA 的分析

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

引物延伸法主要用于 mRNA5' 末端作图。poly (A) ⁺ RNA 先与过量 5' 末端标记的且与靶 RNA 互补的单链寡核苷酸引物杂交，然后用反转录酶延伸这个引物。产生的 cDNA 与 RNA 模板互补且长度与引物 5' 末端和 RNA 5' 末端之间的距离相等。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

用引物延伸法进行 RNA 的分析

一、材料 1. 缓冲液与溶液乙酸铵（10 mol/L）氯仿 DTT ( 1 mol/L) 乙醇甲酰胺加样缓冲液（80% 去离子甲酰胺，10 mmol/L EDTA （pH 8.0），1 mg/ml 二甲苯腈蓝，1 mg/ml 溴酚蓝） KCl ( 1.25 mol/L ) 酚引物延伸反应混合物（20 mmol/L Tris-Cl（pH 8.4）（室温），10 mmol/L