用甲酰胺从哺乳动物细胞中分离高分子质量 DNA

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

本方案是 Kupiec 等所述方法（1987) 的改良版本，包括用蛋白酶 K 消化细胞和组织，用高浓度甲酰胺分离 DNA-蛋白质复合物（染色质用火棉胶袋充分透析去除蛋白酶和有机溶剂等过程。甲酰胺是一种离子化溶剂，能分离蛋白质-DNA 复合物并使蛋白变性和释放，但他并不明显影响蛋白酶 K 的活性。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

用甲酰胺从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA

一、材料 1. 缓冲液和溶液透析缓冲液 1（20 mmol/L Tris-Cl (pH 8.0)，0.1 moI/L NaCl，10 mmol/L EDTA ( pH 8.0)，制备 6 L 透析缓冲液 1，储于 4℃。）透析缓冲液 2（10 mmol/L Tris-Cl (pH 8.0)，10 mmol/L NaCl，0.5 mmol/L EDTA ( pH 8.0)，制备 6 L 透