用大肠杆菌 Klenow 片段标记合成的寡核苷酸实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

通常利用 T4 噬菌体多核苷酸激酶催化的磷酸化反应进行寡核苷酸的标记。但有时需要标记比活度更高的放射性标记的探针，最理想的情况下，磷酸化反应中每一个寡核苷酸分子上有一个 ³²P 原子掺人。而用大肠杆菌 DNA 聚合酶 IKlenow 片段合成与寡核苷酸互补的一条 DNA 链，可获得更高比活度的探针。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）上册，作者：黄培堂。

来源：丁香实验

操作方法

用大肠杆菌 Klenow 片段标记合成的寡核苷酸实验

材料溶液和缓冲液稀样贮存液至适当浓度。甲酰胺加样缓冲液 10XKlenow 缓冲液酶与缓冲液大肠杆菌 DNA 聚合酶 IKlenow 片段凝胶变性聚丙烯酰胺凝胶丙烯酰胺在凝胶溶液中的比例及电泳条件，依反应混合液中寡核苷酸的大小不同而异，表 10-4 列出一些有用的提示：聚丙烯酰胺凝胶通常用 lxTBE(89 mmol/LTris-硼酸，2 mmol/LEDTA)