λ 噬菌体载体 DNA 的碱性磷酸酶处理实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

λ 噬菌体两臂内部末端 5'-磷酸基团的去除，能有效防止自连和减少非重组噬菌体的背景。当使用含单一克隆位点的插入型载体（如 λgt10、λgt11 和 λORF8）或使用虽含多克隆位点但用单一酶切割的插入型载体（如 λgt18-23 和 λZAP) 时，本方法可被用于抑制非重组子背景。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

来源：丁香实验

操作方法

λ噬菌体载体DNA的碱性磷酸酶处理实验

一、材料 1. 缓冲液和溶液 (1) λ 复性缓冲液 100 mmol/L Tris-Cl ( pH 7.6) 10 mmol/L MgCl2 (2) ATP ( 10 mmol/L) (3) 氯仿 (4) EDTA ( 0.5 mmol/L，pH 8.0) (5) 乙醇 (6) 酚：氯仿（1:1，V/V) (7) SDS (10%，m/V) (8) 乙酸钠（3 mol/L，