用固化 Ni2+吸收色谱纯化带组氨酸标签的蛋白实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

多聚组氨酸能与多种过渡金属和过渡金属螯合物结合，因此带暴露的 His-6 的蛋白能结合于固化 Ni²⁺树脂，用适当缓冲液冲洗去除其他蛋白后，再用可溶的竞争性螯合剂洗脱可以回收靶蛋白。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。

来源：丁香实验

操作方法

用固化 Ni2+吸收色谱纯化带组氨酸标签的蛋白实验

材料缓冲液和溶液贮存液、缓冲液和试剂的成分参见附录 1。贮存液稀释至适当浓度。结合缓冲液（pH7.8) 20 mmol/L 磷酸钠 500 mmol/LNaCl 咪唑洗脱缓冲液（pH6.0) 20 mmol/L 磷酸钠 500 mmol/LNaCl 在洗涤缓冲液（pH6.0) 中加入适量 3mol/L 咪唑分别配成 10 mmol/L、50 mmol/L、100 mmol/L 和1